威尼德分子雜交儀：核酸分子雜交中造成高背景的影響因數(shù)

1 雜交溶液或洗滌溶液在使用前未預(yù)熱

2 探針濃度過高或探針未變性。將雜交液裝入雜交管時(shí)，體積減少，探針濃度發(fā)生了變化，應(yīng)確保相應(yīng)地調(diào)整探針濃度。

3 未從探針溶液中去除未結(jié)合核苷酸。

4 預(yù)雜交和雜交溶液中的預(yù)雜交或阻斷劑不足，充分的預(yù)雜交對于阻止膜的非特異性雜交非常重要。

5 雜交或洗脫條件不夠嚴(yán)格：

6 降低鹽濃度。

7 提高溫度。

8 增加SDS的濃度。

9 增加洗脫次數(shù)。

10 膜太干燥，這通常可能是明顯重疊問題的原因，可能由以下原因引起：

11 探針體積太小。溶液更換速度太慢，尤其是批量更換處理時(shí)分子雜交儀放置不平整。

可變軸角度過大。

12 膜上殘留的瓊脂糖可能導(dǎo)致背景模糊。在轉(zhuǎn)化膜后和固定交聯(lián)前（尤其是真空吸干后），應(yīng)在2 x SSC中沖洗膜，以去除殘留的瓊脂糖和多余的鹽。

13 多個(gè)過濾器在瓶子中沒有用篩網(wǎng)隔開。

14 放射自顯影問題。放射自顯影圖上的隨機(jī)黑點(diǎn)和“閃電”標(biāo)記可能是由靜電引起的。